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dil染细胞膜可以固定之后染色
对细胞膜染色需要的染料如下:
DiO(细胞膜绿色荧光探针),呈现绿色荧光。
荧光素双醋酸酯(FDA),绿色荧光。
细胞染色方法:
PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色
是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料(红色),它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色也可以。
annexin-v染色
细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸
(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光;如果用PE标记就发红色荧光。
JC-1染色
JC-1是一种阳离子染料,可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体(monomer)存在,发射光以绿光(~525nm)为主;而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation),发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性
(polarization),其外膜为负极,内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少,因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时,线粒内JC-l的浓度较高,多以多聚体的形式存在,绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential),而与线粒体的形态、体积和密度都无关,因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性,因此,JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。
JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1~5mg/ml),储存于-20℃,用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液,漂洗细胞后直接加入染色液,10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主,当红光信号增强时,红绿相叠,以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测,收集红/绿信号强度,计算其强度比。
钙黄绿素-AM(Calcein-AM):
Calcein -AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein -AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光(激发:490 nm,发射:515 nm)。因此Calcein -AM仅对活细胞染色
细胞活力鉴定——台盼蓝染色法
原理:
细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA 结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。
用品:
1. 4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。 2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
步骤:
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释(106 细胞/ml) 2、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。 3、计数:在三分钟内,用计数板分别计数活细胞和死细胞
台盼蓝染色原理
通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较精确的定量分析。
试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理,试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的原因。死细胞的细胞膜无屏障作用,台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选择透性,对台盼蓝的透性小,进入细胞慢。若染色时间过长,台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。
有dil这个格式吗? 也许LZ看错了吧,会不是是dll格式?假如真的有这个格式的文件,在你的C盘的话,很有可能是病毒文件来的。一般病毒文件都是这样稀奇古怪的
DIL:
是dual in-line的缩写!DIP 的别称(见DIP)。欧洲半导体厂家多用此名称。在数字电路中DIL是digital intergrated logic的缩写!就是数字集成逻辑。在数字电路领域中常指数字逻辑器件。
DLL:
动态链接库英文为DLL,是Dynamic Link Library 的缩写形式,DLL 是一个包含可由多个程序同时使用的代码和数据的库,DLL不是可执行文件。动态链接提供了一种方法,使进程可以调用不属于其可执行代码的函数。函数的可执行代码位于一个 DLL 中,该 DLL 包含一个或多个已被编译、链接并与使用它们的进程分开存储的函数。DLL 还有助于共享数据和资源。多个应用程序可同时访问内存中单个DLL 副本的内容。DLL 是一个包含可由多个程序同时使用的代码和数据的库。
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